Вирусный лейкоз и иммунодефицит крупного рогатого скота являются актуальной проблемой в современной ветеринарии сельскохозяйственных животных. Среди инфекционных патологий коров наиболее распространен энзоотический лейкоз. Так, по данным Россельхознадзора, в 2019 г. Это заболевание занимало первое место по количеству заболевших животных.

Возбудителем болезни является РНК-содержащий вирус семейства Retroviridae, ретровирус лейкоза крупного рогатого скота. Ущерб, причиняемый инфекционными заболеваниями, обусловлен снижением продуктивности животных, преждевременной выбраковкой больного лейкозом скота, уменьшением приплода и потерей его племенной ценности, переводом племенных животных в категорию товарных, затратами на проведение ветеринарно-санитарных и зоотехнических мероприятий.

Лейкоз крупного рогатого скота является очень серьезной проблемой многих фермерских и считается одной из основных задач профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных. После проникновения в организм животного вирус изменяет строение клеток кровеносной системы, нарушая ее функциональность. На этом фоне вырабатывается излишнее количество лимфоцитов, разрастаются ткани и образуются опухоли. Скрытый инкубационный период достаточно большой – до семи лет. Этот период может протекать совершенно бессимптомно, при этом корова все это время будет являться вирусоносителем и заражать других животных.

Вирус передается различными способами – через прямой контакт больного животного со здоровым, через рабочие инструменты, через сперму, кровь и слюну, от больной самки потомству, путем переноса кровососущими насекомыми. На вирус не влияют климатические условия, время года и внешние факторы.

Еще один критический фактор – лейкоз невозможно вылечить. Причина в том, что возбудитель поражает лимфоцитные клетки. Чтобы уничтожить вирус, пришлось бы нейтрализовать лимфоциты, а это чревато иммунодефицитом, при котором у скота развивается состояние, аналогичное ВИЧ и СПИДу. Если на ферме обнаружены две и более зараженные коровы, хозяйство относят к неблагополучному по лейкозу. На основании этого предписывают ограничения и разрабатывают план по оздоровлению поголовья и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных.

Лейкоз имеет три стадии развития. Первая стадия может длиться в течение нескольких лет после заражения и протекает бессимптомно, не проявляясь никакими внешними патологическими признаками. Более того, у коров сохраняется продуктивность и воспроизводительная функция. Симптомы появляются по мере прогрессирования заболевания на второй стадии, которую называют патологической. У животных происходят нарушения состава крови, что приводит к увеличению лимфатических узлов, вплоть до размера мяча. Также увеличиваются и глазные яблоки – они выпячиваются (развивается пучеглазие). Животное становится подверженным любым заболеваниям. Малейшее переохлаждение приводит к его простуде.

Третья стадия самая критичная. Корова становится бесплодной (яловой). Если стельная самка оплодотворилась, то у нее происходят выкидыши. Инфицированные телята постоянно болеют – им тяжело дышать, обнаруживаются проблемы с пищеварением. Крупный рогатый скот стремительно теряет вес, быстро утомляется. Происходит истощение. Ослабевают задние конечности, на теле образуются видимые опухоли.

Ветеринарно-санитарная экспертиза животных

Согласно новым ветеринарным правилам по профилактике и лечения сельскохозяйственных животных, к узаконенным методам лабораторной диагностики добавился иммуноферментный анализ, в основе которого лежит реакция антиген-антитело. По сравнению с другими видами анализов, этот метод наиболее достоверный. Однако, как показывает практика ветеринаров сельскохозяйственных животных, процесс образования антител имеет волнообразный характер и зависит от возраста, физиологического состояния организма животного, условий кормления и других факторов. Поэтому, при лабораторной диагностике энзоотического лейкоза, важно комбинировать серологические и молекулярно-генетические методы анализа, такие как ПЦР, который позволяет надежно обнаруживать возбудителя лейкоза КРС в начале инкубационного периода, когда в крови животного ничтожный уровень специфических антител.

Лейкоз часто протекает в виде смешанной инфекции, вторым возбудителем чаще всего является иммунодефицит крупного рогатого скота. Поэтому возникла необходимость разработки методов диагностики сельскохозяйственных животных, которые позволяют выявлять одновременно возбудителей лейкоза и иммунодефицита. Такой способ был создан на основе метода мультиплексной полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

В журнале «Ветеринария сельскохозяйственных животных» 01/2022 были опубликованы результаты исследования, посвященного изучению одновременного определения возбудителей этих заболеваний. Опыт проводился на базе ЗАО «Евроген» (Москва). Для работы были взяты два образца: ДНК возбудителя лейкоза и провирусная ДНК возбудителя иммунодефицита коров. В исследовании также были задействованы образцы крови коров, содержащих антитела к вирусу лейкоза. В процессе исследования было использовано 73 пробы крови крупного рогатого скота. Отбор образцов проводился с применением метода реакции иммунодифузии, который позволяет обнаруживать антитела к антигенам лейкоза. Разработанные контрольные образцы необходимы для проверки прохождения копирования участков ДНК, содержащих искомые антитела.

В процессе исследования был использован метод температурно-временного режима постановки ПЦР, а именно подбор температуры «отжига» праймеров и зондов. В результате были выбраны определенные температурные режимы, которые позволяют наиболее достоверно определять комбинации провируса иммунного дефицита и лейкоза крупного рогатого скота. По итогам исследования было определено, что что в 13 образцах крови содержались фрагменты ДНК как возбудителя лейкоза, так и вируса иммунодефицита крупного рогатого скота.

Заключение

После определения основных характеристик (чувствительность, специфичность) разработанный способ индикации провирусной лейкоза и иммунодефицита крупного рогатого скота был испытан на образцах крови коров, полученных из неблагополучного по лейкозу хозяйства. Как показали дальнейшие исследования, разработанный метод диагностики позволяет одной реакцией и в одной реакционной смеси одновременно выявлять провирусную ДНК обоих искомых возбудителей.

Созданный способ диагностики сельскохозяйственных животных обладает высокой чувствительностью, которая составляет 1–3 молекулы провирусной ДНК обоих искомых возбудителей в 1 мкл ПЦР-смеси. Также доказана высокая специфичность разработанного способа при исследовании образцов гетерогенной и гомогенной ДНК. Результаты исследований по диагностике лейкоза крупного рогатого скота использованы при составлении целевой программы по профилактике и лечению болезней животных.

Ознакомиться с полной версией материала и другими публикациями вы можете, оформив подписку на журнал «Ветеринария сельскохозяйственных животных » ИД «ПАНОРАМА».